cRNA探針,是以cDNA為模板,通過體外轉錄獲得cRNA制備而成的一種單鏈探針,是一種核酸探針,屬于RNA探針。
cRNA探針的制備過程是,從組織或細胞中提取mRNA,經逆轉錄作用獲得cDNA,對cDNA進行克隆并連接到載體上,以克隆的cDNA為模板,以含有標記物的核苷酸為原料,進行體外轉錄產生cRNA。在此過程中,cRNA的轉錄方向可以控制,能夠獲得帶有標記物的與mRNA同序列的同義cRNA探針,或者與mRNA互補的反義cRNA探針。
cRNA探針的工作原理是,利用cRNA探針與樣品核酸分子進行雜交,若樣品中含有與cRNA探針互補的核酸序列(即目標核酸序列),則二者相互作用通過氫鍵緊密相連形成雙鏈,洗去未雜交的多余cRNA探針,基于標記物的自顯影或者發光作用對樣品進行檢測,獲得目標核酸序列相關信息,即利用與cRNA探針檢測出與之互補的核酸序列。
采用cRNA探針雜交形成的雙鏈穩定性高,不會受RNA酶影響,而cRNA探針本身對RNA酶敏感,會被破壞,因此可以利用RNA酶來清除未雜交的多余cRNA探針,以排除干擾,便于后續對樣品進行探測觀察。
cRNA探針可應用范圍廣泛,包括檢測同種基因在不同條件下的表達水平、協助注釋未知基因組區域、研究基因組復制機制、檢測病毒的存在以及含量等。例如,利用地高辛標記的cRNA探針,在胰腺切片上進行原位雜交,可用來檢測胰島素基因表達產物mRNA,結果可靠性高。但cRNA探針制備過程較為復雜,對實驗設備、試驗環境、實驗人員技術要求較高。
新思界
行業分析人士表示,與歐美國家相比,我國基因研究起步較晚,但發展迅速,部分技術已經達到或接近國際先進水平。同時,為實現疾病早發現、早治療以及精準治療,我國基因測序行業迅速崛起,特別是高通量測序(NGS)發展速度快,倒推基因研究技術不斷進步。在此背景下,我國市場對核酸探針需求不斷增長,cRNA探針作為核酸探針的一種,未來市場前景良好。